Teknik Tusukan Sumsum Tulang Dan Biopsi dalam Primat Bukan{0}}Manusia: Fokus Pada Aplikasi Jarum Biopsi

Primat bukan{0}}manusia (NHP) ialah haiwan eksperimen teras untuk penyelidikan hematologi praklinikal, pembangunan ubat sel stem, penerokaan mekanisme imun dan kajian perubatan translasi. Spesimen sumsum tulang-berkualiti tinggi,-rendah dan lengkap ialah premis dan asas data percubaan yang boleh dipercayai. Tusukan sumsum tulang dan biopsi teras ialah teknik persampelan sumsum tulang in vivo yang paling utama untuk primat bukan{5}}manusia. Berbeza daripada pengumpulan darah vena biasa, teknologi ini bergantung pada jarum biopsi berongga keras profesional untuk menembusi tulang kortikal tulang panjang dan tulang rata, dan mendapatkan cecair sumsum tulang yang berkelayakan dan tisu teras sumsum tulang yang utuh dari rongga medula. Keseluruhan operasi sangat bergantung pada spesifikasi prestasi, padanan model dan penggunaan piawai jarum biopsi sumsum tulang. Digabungkan dengan protokol percubaan haiwan matang dan pengalaman literatur, artikel ini menghuraikan secara sistematik -spesifikasi operasi proses penuh bagi tusukan dan biopsi sumsum tulang NHP, memfokuskan pada ciri pemilihan, kelebihan aplikasi dan keperluan operasi piawai bagi jarum biopsi khusus, untuk menyediakan panduan teknikal piawai untuk penyelidik eksperimen.

Prinsip teknikal asas tusukan sumsum tulang dan biopsi dalam primat bukan{0}}manusia adalah konsisten dengan sistem persampelan sumsum tulang taring klasik (Crow et al., 2009). Logik teras adalah menggunakan jarum biopsi berongga tegar untuk menembusi penghalang tulang kortikal yang keras, mencari dengan tepat rongga medula, dan mendapatkan cecair sumsum tulang dan spesimen teras pepejal melalui aspirasi tekanan negatif dan pembenaman pemotongan berputar. Mengikut ciri-ciri anatomi NHP, tapak persampelan biasa dibahagikan kepada kawasan kaki depan dan belakang. Tapak pensampelan keutamaan kaki belakang termasuk puncak iliac dan fossa trochanteric femoral (Wolf & White, 2012), yang sesuai untuk kebanyakan model primata bersaiz sederhana dan besar-; tapak alternatif forelimb ialah tuberkel humerus yang lebih besar, dengan kedudukan anatomi yang cetek dan operasi yang mudah, sesuai untuk persampelan tambahan dan eksperimen persampelan berulang. Tapak pensampelan yang berbeza mempunyai perbezaan dalam ketebalan tulang, diameter rongga medula dan liputan tisu lembut, yang perlu dipadankan dengan spesifikasi jarum biopsi sumsum tulang yang sepadan untuk memastikan kecekapan pensampelan dan kualiti spesimen.

Sebagai pembedahan tulang invasif, tusukan dan biopsi sumsum tulang NHP akan menyebabkan rangsangan tisu dan tindak balas kesakitan yang pasti. Untuk memastikan kebajikan haiwan dan operasi eksperimen yang stabil, semua operasi pensampelan mesti dilakukan di bawah bius piawai. Penyelidik boleh memilih anestesia am atau anestesia sasaran tempatan mengikut kitaran eksperimen, kekerapan pensampelan dan keadaan individu haiwan, untuk mencapai analgesia intraoperatif dan pasca operasi yang mencukupi. Di samping itu, keseluruhan proses mesti mematuhi spesifikasi percubaan steril, termasuk pencukuran praoperasi dan penyediaan kulit bagi kawasan pensampelan, penyahjangkitan berbilang-standard dengan povidon-iodin dan alkohol, meletakkan tuala steril dan memakai sarung tangan steril dan instrumen pembedahan, untuk mengelakkan jangkitan tempatan, keradangan luka berulang dengan berkesan dan lain-lain selepas pembedahan.

Klasifikasi, Pemilihan dan Kelebihan Prestasi Jarum Biopsi Sumsum Tulang Khas

Jarum biopsi sumsum tulang ialah instrumen ketepatan teras persampelan sumsum tulang NHP, yang menentukan kadar kejayaan satu-tusukan sekali, integriti spesimen dan tahap pencemaran darah periferi. Pada masa ini, terdapat berbilang model komersial matang jarum pensampelan sumsum tulang khas untuk haiwan eksperimen, termasuk jarum Rosenthal, Klima, Illinois sternal/iliac dan jarum Jamshidi. Setiap model mempunyai reka bentuk yang berbeza dalam panjang jarum, diameter tolok, struktur teras dalam dan cengkaman pegang tangan, menyesuaikan diri dengan jenis badan haiwan yang berbeza, ciri anatomi tulang dan tujuan pensampelan eksperimen.

Di antara semua jenis jarum, yangJarum biopsi sumsum tulang Jamshidi 14Gialah piawaian emas untuk biopsi teras sumsum tulang NHP, yang merupakan spesifikasi yang paling disyorkan untuk operasi eksperimen. Jarum biopsi jenis ini menggunakan struktur berongga tegar yang dioptimumkan, dengan stail pepejal pusat yang dipadankan. Badan jarum mempunyai kekerasan dan keliatan sederhana, yang boleh menembusi tulang kortikal primata dengan berkesan tanpa membongkok atau tergelincir. Pinggiran keratan lingkaran di hujung jarum boleh membenamkan dan memintas tisu teras sumsum tulang secara stabil, mengelakkan pemecahan spesimen dan kerosakan penyemperitan tisu yang disebabkan oleh jenis jarum yang tidak profesional. Berbanding dengan-jarum aspirasi tolok nipis, jarum biopsi Jamshidi 14G mempunyai diameter rongga dalam yang lebih besar, yang boleh memperoleh-spesimen teras volum yang mencukupi sambil memastikan keselamatan, memenuhi keperluan pengesanan morfologi, pembahagian tisu dan analisis indeks percubaan biopsi teras. Berbanding dengan jarum tebal yang bersaiz besar, ia boleh mengurangkan trauma tulang yang berlebihan dan pendarahan intraoperatif, mengimbangi kualiti spesimen dan penggunaan haiwan yang boleh berulang.

Semua jarum biopsi sumsum tulang khas direka bentuk dengan gaya pusat yang sepadan, yang merupakan ciri struktur utama yang berbeza daripada jarum suntikan biasa. Stylet boleh menyekat sepenuhnya rongga berongga badan jarum semasa tusukan, menghalang tisu lembut kulit dan serpihan tulang daripada memasuki rongga jarum untuk menyekat saluran paip, dan memastikan kemajuan lancar aspirasi tekanan negatif berikutnya dan pemotongan tisu teras. Dalam percubaan pensampelan berulang, penyelidik perlu memilih spesifikasi jarum mengikut berat badan haiwan dan saiz tulang: jarum biopsi pengukur pendek dan halus-untuk primat kecil (berat badan kurang daripada 5kg) dan jarum Jamshidi sederhana 14G biasa-panjang untuk individu sederhana dan besar, merealisasikan padanan tepat peralatan dan objek eksperimen.

Langkah Berjaga-jaga Sebelum Operasi Utama untuk Pensampelan Jarum Biopsi

Untuk mengelakkan pembekuan spesimen, hemolisis dan pencemaran, dan meningkatkan kadar sampel eksperimen yang layak, prarawatan piawai dan spesifikasi operasi untuk jarum biopsi mesti dilaksanakan sebelum pensampelan. pertama,heparin antikoagulasi prarawatan jarum dan picagariadalah wajib. Sebelum digunakan, ekstrak sejumlah kecil larutan heparin untuk menyiram dinding dalaman jarum biopsi dan picagari yang dipadankan, dan mengeluarkan cecair sisa sepenuhnya, membentuk salutan antikoagulan heparin yang seragam pada dinding dalaman rongga jarum. Operasi ini berkesan boleh menghalang pembekuan cecair sum-sum tulang secara berkesan selepas pensampelan, mengelakkan kegagalan penyediaan smear dan pengesanan sel yang disebabkan oleh pembekuan spesimen, dan merupakan langkah prarawatan utama untuk pemerolehan cecair sum-sum tulang-berkualiti tinggi.

Kedua, untuk-percubaan pensampelan haiwan berulang jangka panjang,pemilihan putaran tapak tusukanharus diguna pakai untuk mengelakkan tusukan berulang di satu tapak, yang boleh menyebabkan hiperplasia tulang kortikal, lekatan tisu tempatan dan peningkatan rintangan tusukan, mengakibatkan kegagalan pensampelan dan peningkatan trauma haiwan. Dari segi skema analgesia, suntikan analgesik tempatan ke dalam kulit dan tisu lembut dalam tapak tusukan adalah lebih baik daripada anestesia am yang mudah, yang boleh melegakan kesakitan dan ketidakselesaan luka selepas pembedahan dengan berkesan, mengurangkan tindak balas tekanan haiwan, dan memudahkan pemulihan selepas pembedahan dan eksperimen berulang yang seterusnya.

Dari segi kawalan volum pensampelan, dihadkan oleh kapasiti rongga jarum jarum biopsi dan isipadu darah fisiologi haiwan eksperimen, volum pensampelan tapak tusukan tunggal tidak boleh melebihi 2mL. Pengekstrakan yang berlebihan akan membawa kepada pencairan darah periferi yang serius, mengurangkan perkadaran sel bernukleus dan tisu sumsum tulang yang aktif dalam spesimen, mengganggu keputusan pengesanan eksperimen, dan menjejaskan ketepatan analisis indeks hematologi dan pemerhatian morfologi tisu.

Prosedur Operasi Standard untuk Tusukan Iliac Crest (Pembedahan Jarum Biopsi Teras)

Puncak iliac ialah tapak persampelan yang paling konvensional dan pilihan untuk biopsi sumsum tulang bukan{0}}primata manusia, dengan tulang kortikal tebal, tisu hematopoietik rongga medula yang kaya dan beberapa organ penting bersebelahan, menampilkan keselamatan yang tinggi dan kadar kejayaan pensampelan yang tinggi. Selepas haiwan itu dibius sepenuhnya, letakkan ia dalam kedudukan meniarap, lipat kedua-dua anggota bawah di bawah perut untuk mengangkat tulang pinggul dan mendedahkan sepenuhnya kawasan pensampelan puncak iliac. Kebanyakan primat bukan{3}}manusia mempunyai rambut yang jarang di kawasan puncak iliac, yang hanya memerlukan pencukuran dan penyediaan kulit yang mudah. Kulit dibasmi kuman secara bergantian dengan povidone-iodin dan alkohol, dan tuala lubang steril diletakkan untuk mengasingkan kawasan pembedahan dan memastikan operasi steril.

Selepas mengesahkan sempadan iliac crest dengan palpasi, buat hirisan kulit kecil dengan bilah pembedahan steril di bahagian anterior crest iliac untuk mengurangkan rintangan geseran jarum biopsi semasa penembusan. Jajarkan jarum biopsi Jamshidi 14G dengan hirisan, maju perlahan ke tepi dorsal anterior puncak iliac, pastikan badan jarum berserenjang dengan satah puncak iliac sepanjang masa, dan gunakan tekanan ke bawah yang berterusan dan stabil sambil memutar badan jarum mengikut arah jam. Postur memasukkan jarum menegak adalah kunci kepada biopsi yang berjaya, yang boleh memastikan bahawa hujung jarum dengan tepat memasuki rongga medula, mengelakkan penembusan serong yang membawa kepada pembelahan tulang kortikal dan kerosakan tisu bersebelahan, dan memaksimumkan prestasi pemotongan dan pensampelan hujung jarum biopsi.

Apabila badan jarum menembusi tulang kortikal, pengendali jelas akan merasakan pengurangan rintangan penembusan secara tiba-tiba, dan jarum biopsi boleh dipasang secara stabil dalam tisu tulang tanpa berjabat, menunjukkan bahawa hujung jarum telah berjaya memasuki rongga medula. Pada masa ini, tarik keluar stylet pusat sepenuhnya, sambungkan picagari steril 10mL ke ekor jarum biopsi, dan gunakan tekanan negatif yang stabil dengan menarik omboh. Sumsum tulang primata segar berwarna merah gelap dan berbuih, dengan kelikatan lebih tinggi daripada darah periferi, dan mengandungi-tisu tulang trabekular berwarna cerah, yang merupakan spesimen sumsum tulang yang layak.

Jika tiada cecair sumsum tulang diekstrak, jangan tarik keluar badan jarum secara membuta tuli. Putar jarum biopsi 90 darjah –180 darjah untuk melaraskan julat pemotongan dan pensampelan hujung jarum; jika masih tidak sah, masukkan semula stylet, laraskan sedikit kedalaman badan jarum ke hadapan atau ke belakang, dan gunakan tekanan negatif sekali lagi. Untuk spesimen eksperimen diagnostik, volum pensampelan tapak tunggal dikawal dalam 1mL untuk memastikan ketulenan spesimen; jika sejumlah besar sampel sumsum tulang diperlukan untuk eksperimen, beberapa tapak tusukan hendaklah dipilih untuk pensampelan dan bukannya pengekstrakan berlebihan di satu tapak. Selepas pensampelan, cabut jarum biopsi dengan cepat, sapukan hemostasis mampatan terus pada tapak tusukan untuk masa yang lama, dan jahit kulit dengan jahitan helai tunggal jika pendarahan berterusan berlaku.

Operasi Tusukan dan Biopsi Fossa Trochanteric Femoral dan Humer Proksimal Humer

Fossa trochanteric femoral ialah tapak persampelan tambahan yang ideal untuk primata kecil-bukan manusia (berat badan<5kg). The local bone structure is shallow, and the medullary cavity is concentrated, which is convenient for the positioning and penetration of fine-gauge biopsy needles. However, the proximal thigh muscle layer of large primates is thick, resulting in large puncture resistance and difficult operation. The core operation principle is consistent with iliac crest biopsy: place the animal in lateral position, hold the proximal thigh with the palm, locate the trochanteric fossa at the inner and distal side of the femoral greater trochanter by thumb palpation, insert the biopsy needle toward the femoral shaft to penetrate into the medullary cavity, and complete negative pressure aspiration and specimen collection according to the standard needle operation procedure.

Humerus proksimal adalah satu lagi tapak persampelan alternatif yang cekap. Diameter tulang panjang humerus lebih besar, dan rongga medula lebih luas dan cetek, menjadikan kedudukan jarum biopsi lebih tepat dan operasi lebih mudah. Letakkan haiwan dalam kedudukan sisi, pegang bahagian depan proksimal, palpasi sulkus intertuberkular antara tuberkel besar dan kecil humerus, masukkan jarum biopsi ke arah batang humerus untuk memasuki rongga medula. Tapak ini mempunyai keperluan yang rendah untuk ketepatan badan jarum, kadar kegagalan tusukan yang rendah, dan sesuai untuk pensampelan pantas dan eksperimen haiwan kelompok.

Kaedah Perfusi Tulang Panjang dan Aplikasi Jarum Biopsi Teras Dalam-mendalam

Berbeza daripada tusukan jarum-tunggal konvensional, kaedah perfusi tulang panjang (Kushida et al., 2000) ialah-teknologi pensampelan sumsum tulang ketulenan tinggi yang sesuai untuk-percubaan berketepatan tinggi, yang memerlukan penggunaan bersama dua jarum biopsi sumsum tulang. Operasi perlu memasukkan jarum biopsi yang dipadankan ke dalam rongga medula pada kedua-dua hujung batang tulang panjang masing-masing, menyuntik garam normal steril perlahan-lahan melalui satu jarum biopsi dan mengumpul sumsum tulang-yang mengandungi minyak wangi ke dalam bekas tertutup steril melalui tiub sambungan yang disambungkan ke jarum lain. Mod pensampelan koperasi dwi{8}}jarum ini mengelakkan pencemaran darah periferi dalam tusukan konvensional dengan berkesan dan spesimen sumsum tulang yang diperolehi mempunyai ketulenan yang lebih tinggi, yang sesuai untuk pengasingan sel stem, kultur in vitro dan eksperimen pengesanan omik berketepatan tinggi-.

Operasi Pembezaan Aspirasi Sumsum Tulang dan Biopsi Teras Berdasarkan Jarum Biopsi

Aspirasi sumsum tulang dan biopsi teras berkongsi tapak pensampelan yang sama dan peralatan jarum biopsi, tetapi logik operasi jarum pasca operasi adalah berbeza sama sekali, yang menentukan dua jenis spesimen eksperimen: cecair sumsum tulang cecair dan tisu teras sumsum tulang pepejal. Dalamaspirasi sumsum tulang, selepas jarum biopsi dipasang di rongga medula, tarik keluar stilet dan sambungkan picagari untuk menggunakan tekanan negatif untuk mengekstrak cecair sumsum tulang cecair, yang digunakan untuk pengiraan sel, morfologi smear dan pengesanan sitometri aliran.

Dalambiopsi teras sumsum tulangmemfokuskan pada spesimen tisu, selepas mengeluarkan stylet, jarum biopsi Jamshidi terus maju 1–2cm ke dalam rongga medula melalui tekanan yang stabil dan putaran perlahan. Pinggiran pemotongan lingkaran di hujung jarum boleh membalut sepenuhnya tisu teras sumsum tulang. Kemudian longgarkan badan jarum dengan memutar dan mengayun, tarik sedikit dan masukkan semula untuk memisahkan bahagian bawah tisu teras daripada trabekula tulang. Selepas mengesahkan bahawa tisu telah dipisahkan sepenuhnya, cabut jarum biopsi secara bersepadu melalui tarikan berputar. Akhir sekali, tolak spesimen teras sumsum tulang pepejal yang utuh keluar dari rongga jarum dengan penolak linear, dan betulkan dengan formalin 10% untuk bahagian tisu dan analisis patologi.

Kesimpulan

Penggunaan piawai jarum biopsi sumsum tulang ialah kunci teras kepada kejayaan -bukan tusukan sumsum tulang primata manusia dan eksperimen biopsi. Jarum biopsi Jamshidi 14G, dengan reka bentuk struktur yang dioptimumkan dan prestasi pensampelan yang stabil, adalah peralatan pilihan untuk biopsi teras NHP. Penyelidik perlu memilih spesifikasi jarum mengikut jenis badan haiwan dan tujuan eksperimen, melaksanakan dengan ketat prarawatan heparin, operasi steril dan protokol putaran tapak, dan menguasai teknik operasi aspirasi dan biopsi teras yang berbeza. Pemilihan dan operasi jarum piawai dengan berkesan boleh meningkatkan ketulenan dan integriti spesimen, mengurangkan trauma haiwan dan ralat percubaan, dan menyediakan sokongan teknikal yang kukuh untuk penyelidikan hematologi dan perubatan translasi praklinikal berdasarkan-model primat manusia.